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赭曲黴（méi）毒素A免疫親和柱操作說明書
【概要】
赭曲黴毒素A （Ochratoxin A）是曲黴屬和青黴（méi）屬的真菌形成的次級代謝產物，屬烈性的腎髒毒和肝髒毒，廣泛存在於各種食物中，穀物（wù）及其副產品是赭曲黴毒素A的主要來源。動（dòng）物實（shí）驗表明攝入了被這種（zhǒng）毒素汙（wū）染的飼料後，會發生急性或（huò）慢性中毒症。防止汙染赭曲黴毒素A的（de）食品和飼料直接或間接地進入人類食物鏈，加強對赭曲黴毒素A的（de）檢測十分重（chóng）要。
【適用範圍及性能】
用於定性、定量檢測穀物、酒類等食品和飼（sì）料等樣本中的赭曲黴毒素A時的樣品前處理。
柱容量：≥200ng
回收率：≥90%
【試驗原理】
本產品的測定的基礎是抗原抗（kàng）體反（fǎn）應，赭曲黴毒素A單克隆抗體連接在（zài）柱內（nèi）凝膠上，樣品中的赭曲黴毒素A經過提取、過（guò）濾、稀釋，然後（hòu）將樣品提（tí）取液緩慢的通過赭曲（qǔ）黴毒素A免疫親和（hé）層析柱，在免疫親和柱內，赭曲黴毒素A與抗（kàng）體結合（hé），之後洗滌免疫親和柱除去沒有被結合的其他物質。用（yòng）甲醇（chún）洗（xǐ）脫（tuō）赭曲黴毒素A，然後注入到分析儀器中用於檢測。
【包裝組成】
根據不同規格，每一個盒中包含5-25支赭曲黴（méi）毒素A免疫親和層析柱及（jí）1份說明書。
【需（xū）要（yào）而未提供的設備及試劑】
設（shè）備：
┅┅高（gāo）速均質器或組織勻漿機
┅┅粉碎機
┅┅200ml/50ml量筒
┅┅天平：感量0.1g
┅┅微量（liàng）移液器：單道 100l～1000l
┅┅槽紋濾紙（折疊快（kuài）速定（dìng）性或定量濾紙）
┅┅玻璃微纖維濾（lǜ）紙（1.5m孔徑）
┅┅50ml漏（lòu）鬥
┅┅一次性玻璃試管
┅┅泵流操作架（包括空氣泵，不同容積的玻璃注射器等）
試劑：
┅┅甲醇（色譜級）
┅┅蒸餾水或去離子水
┅┅pH7.0磷酸鹽緩（huǎn）衝溶液（PBS緩衝液）：稱取8.0g氯化鈉，1.2g磷酸氫二鈉，0.2g磷酸二氫鉀，0.2g氯化鉀，用（yòng）990mL純（chún）水溶解，然（rán）後用（yòng）濃鹽酸調節pH值至7.0，最後用純水稀釋至1000mL
┅┅清洗緩（huǎn）衝液：25g 氯化（huà）鈉+5g碳酸氫鈉+0.1mL吐溫-20
用（yòng）純水（shuǐ）稀釋（shì）至（zhì）1000 mL
【試劑配（pèi）製】
樣品提取液：配製甲醇-水（8：2）溶液作為樣品提取液
【樣本處理步驟】
（一）花生，玉米，大米，小麥及其製品和（hé）飼料
┅┅稱取（qǔ）20g粉碎的樣品於100mL容量瓶中，加入5.0g氯化鈉，以甲醇-水（8：2）溶液定容；
┅┅轉移到均質杯中（zhōng），以均（jun1）質（zhì）器高速攪拌，提（tí）取（qǔ）2分鍾；
┅┅4000r/min離心5min或用定量濾紙過濾；
┅┅取10mL濾液並加入40mLPBS緩衝液稀釋，用玻璃微纖（xiān）維濾紙過（guò）濾，取過（guò）濾（lǜ）後液體（tǐ）待測；
┅┅將免疫親和柱連接於10.0mL玻璃注射（shè）器下。準確（què）移取10.0mL樣（yàng）品提取液注入玻璃注射器；
┅┅將空（kōng）氣壓力泵與玻璃注射器連接，調節壓力使溶液以（yǐ）約1滴/S流速緩（huǎn）慢通過免疫親和柱，直至（zhì）2~3mL空（kōng）氣通（tōng）過柱體；
┅┅以10.0mL清洗緩衝液淋（lín）洗柱子1次，流速為1滴-2滴/S，棄去全部流（liú）出液，
┅┅再以10.0mL水淋（lín）洗柱子1次，流速為1滴-2滴/S，棄去全部流出液，並使2mL~3mL空氣通過柱體；
┅┅準確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫，流速為1 滴/S，收集全部洗脫液於玻（bō）璃試管中，供檢測用。
（二）啤酒，黃酒等酒類
┅┅取10mL試樣脫氣後與90mLPBS緩衝液混勻，用玻璃微纖維濾紙過濾，取過濾後液體待（dài）測；
┅┅將免疫親（qīn）和柱連接（jiē）於10.0mL玻璃注射器下。準確移取10.0mL樣品提取液注入（rù）玻璃注射器；
┅┅將空氣壓力（lì）泵與玻璃注射器連（lián）接，調節壓力使溶液以約1滴/S流速（sù）緩慢通（tōng）過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體；
┅┅以10.0mL清洗緩衝液淋洗柱子1次，流速為（wéi）1滴-2滴/S，棄去全部流出液，
┅┅再（zài）以10.0mL水淋（lín）洗柱子1次，流速為1滴-2滴/S，棄去全部流出液，並使2mL~3mL空（kōng）氣通過柱體；
┅┅準確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫，流速為1 滴/S，收集全
部洗脫液於玻璃試管中，供檢測用。
【結果判定（dìng）】
經免疫親和柱淨化後，收集到的甲醇洗脫液可直接使用（yòng）熒光計或者HPLC檢測，也可使用薄層色譜或者酶聯免疫試劑盒（hé）進行檢測。收集到的（de）1ml洗脫液中的赭曲黴毒素A含量相當於1g樣品中赭曲黴（méi）毒素A含量。
【注意事項】
┅┅赭曲黴毒素危害（hài）極大，應戴手套操作。
┅┅不要使用過了有效日期的免疫親和柱。
【貯藏條件及保存期】
貯（zhù）藏條件：親和柱可於常溫保存，2-8℃儲存可延（yán）長有效期（qī），不可凍（dòng）存
保存（cún）期：該產品有效期為12個月（yuè）。
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