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嘔吐毒素免疫親和柱操作說明書
【概要】
脫氧（yǎng）雪腐鐮（lián）刀菌烯醇(deoxynivalenol， DON) 又稱嘔吐毒素(vomitoxin)，主要是由鐮刀菌的某些（xiē）種產生的化學（xué）結構和生物活性相似的有毒代謝產物——單端孢（bāo）黴烯族化合物中的（de）一種（zhǒng）。廣泛存在於全（quán）球，主要汙染小麥、大麥、玉米等穀類作物（wù），也汙染糧（liáng）食製品，人和動物在（zài）誤食被該毒素汙染的糧（liáng）穀類後可以產生廣泛的毒性效應。DON最明顯的毒性作用是（shì）引起嘔吐（tǔ）、腹（fù）瀉、腹痛等症，並延緩生長、降低免疫（yì）機能，與貧血、免（miǎn）疫抑製、食管癌、克山病也具有密切聯係。給人（rén）、家畜的健康造成巨大威脅。
【適用範圍及性能】
用於定性、定量檢測穀物、酒類等食品和飼料等樣本中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇時的樣品（pǐn）前處理。
柱（zhù）容量：≥500ng
回收率：≥80%
【試驗原理】
本產品的測定的基礎是抗原抗體（tǐ）反應，脫氧雪腐鐮刀菌烯醇單克隆抗體連接在柱內凝膠（jiāo）上，樣品中的脫氧雪腐（fǔ）鐮刀菌烯醇經過提（tí）取、過濾、稀釋，然後將樣品提取液緩慢的通過脫氧雪（xuě）腐鐮刀菌烯醇免疫（yì）親和層析柱，在免疫親和柱內，脫氧雪腐（fǔ）鐮刀菌烯醇與抗體結合，之後洗滌免疫（yì）親和柱除去沒有被結合的其他物質。用甲醇洗（xǐ）脫脫氧雪腐鐮刀菌烯醇，然後注入（rù）到分析儀器（qì）中用於檢測。
【包裝組成】
根據不同規格，每（měi）一個盒中包含5/25支脫氧雪腐鐮刀（dāo）菌烯醇免疫親和層析柱及1份說明書（shū）。
【需要而（ér）未提供的設備及試劑】
設備：
┅┅高（gāo）速均質器或組（zǔ）織勻（yún）漿機
┅┅粉碎（suì）機
┅┅200ml/50ml量筒
┅┅天平：感量（liàng）0.1g
┅┅微量移液器：單道 100μl～1000μl
┅┅槽（cáo）紋濾紙（折疊快速定性或定量濾紙）
┅┅玻璃微纖維濾紙（1.5μm孔徑）
┅┅50ml漏鬥
┅┅一次性玻璃試（shì）管
┅┅泵流操作架（包括空氣泵，不同容積（jī）的玻璃注射器等）
試（shì）劑：
┅┅蒸餾水或去離子水
┅┅聚乙二醇（PEG）2000
┅┅色譜級甲（jiǎ）醇
┅┅pH7.0磷酸鹽緩衝溶液（PBS）：稱取8.0g氯（lǜ）化鈉，1.2g磷酸氫二鈉，0.2g磷酸二氫鉀，0.2g氯化鉀，用990mL純水溶解，然後用濃鹽（yán）酸調節（jiē）pH值（zhí）至7.0，最後（hòu）用純水稀釋至1000mL
【樣本處理步驟】
（一）花生（shēng），玉米，大米，小麥及其製品和飼料（稀釋倍數4）
┅┅稱取25g粉碎的樣品，加入10g聚（jù）乙二醇8000後，用（yòng）去離子水定容；
┅┅轉移至均質（zhì）杯中，均質（zhì）器高速均質2分鍾；
┅┅4000r/min離心5min或用定量濾紙過濾，取上清液，使用玻璃纖維濾紙過濾後待用；
┅┅將免疫親和柱連接於10.0mL玻璃注射器下。準確移取2mL上述樣品提取液注入（rù）玻璃注射器（qì）；
┅┅將空氣（qì）壓力泵與玻璃注射器連（lián）接，調節（jiē）壓力使溶液以約1滴/s流速緩慢通過免疫（yì）親（qīn）和柱，直至2~3mL空（kōng）氣通過柱體；
┅┅以5.0mLPBS溶液和去離（lí）子（zǐ）水快速淋洗柱子1次，流速（sù）為2-3滴/秒。棄去全（quán）部（bù）流出液，並使2mL~3mL空（kōng）氣（qì）通過柱體；
┅┅準確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫，流速（sù）為1 滴/S，收集全部（bù）洗脫（tuō）液於玻璃試管中，供檢測用。
（二）酒（jiǔ）類（稀釋倍數0.5）
┅┅取（qǔ）脫氣酒類試樣(含二氧化碳的酒類樣品使用前先置於4℃冰箱冷藏30min，過濾或超聲脫氣)或（huò）其他不含二氧化碳的（de）
酒類（lèi）試樣20g(精（jīng）確到0.01g)，加人（rén）1g聚乙二醇(4.3)，用水（shuǐ）定容至25.0mL，混勻。
┅┅用（yòng）玻璃纖維濾紙過濾（lǜ）至濾液澄清
┅┅將免疫親和柱連接（jiē）於10.0mL玻璃注射器下。準確移取2mL上（shàng）述樣品提（tí）取液注入玻璃注（zhù）射器；
┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調節壓力使溶液以約1滴/s流速緩慢通過免疫親和柱，直（zhí）至2~3mL空氣通過柱體；
┅┅以（yǐ）5.0mLPBS溶液和去離子水快速（sù）淋洗柱子1次，流速（sù）為（wéi）2-3滴/秒。棄（qì）去全部流出液，並使2mL~3mL空氣（qì）通過柱體；
┅┅準確加入1.0mL色（sè）譜級甲醇洗脫，流速為（wéi）1 滴/S，收集全部洗脫液於（yú）玻璃試管中，供檢測用。
【結果判定】
經免（miǎn）疫親和柱淨化後，收集到的甲醇洗脫液（yè）可（kě）直接使用熒光計或者HPLC檢測，也可使用薄層色譜或者酶（méi）聯免疫試劑盒進行檢測。也可氮氣吹幹後，複溶以提升濃度（稀釋倍數相應（yīng）變化）。
【注意事項】
┅┅嘔吐毒素危害很大，應戴手套（tào）操（cāo）作（zuò）。
┅┅不（bú）要使用（yòng）過了有效日期的免疫親和（hé）柱（zhù）。
【貯藏條件及（jí）保存期】
貯藏條（tiáo）件：親和柱可於常溫保存，2-8℃儲存可延長有效期，不可凍存
保存期（qī）：該產品有效（xiào）期為12個月。
