黃曲黴毒素總量免疫親和柱操作說明書

【概要】

黃曲黴毒素（Aflatoxin）是黃曲黴、寄生曲黴等真菌產生的次（cì）級代（dài）謝產物，被世界衛生組織的癌症研究機構劃分為1類致癌物，同時又是一種毒性極強的劇毒物質，廣泛存在於各（gè）種食物中。玉米（mǐ），花生，大米（mǐ），小麥等穀物及其副產品是（shì）黃曲黴毒素的（de）主要來源，同時飼料中的黃曲黴毒素B1經過動物代謝後產生的黃曲黴毒素M1仍然具（jù）有很強的毒性和致（zhì）癌性，也廣泛（fàn）存在牛奶，血液，組織等食品中。黃曲黴毒素作為肝（gān）癌（ái）的三大誘（yòu）因之一，也是誘發胃癌，腸癌等疾病的主要原因之一，對人類的健康構成很（hěn）大威脅。世界各國對（duì）食品，飼料中的黃（huáng）曲黴毒素都有（yǒu）嚴格的限量標準。

【適用範圍及性能】

用於定性、定量檢測穀物、副食品、酒類等（děng）食品和飼料（liào）等樣本中的（de）黃曲黴毒素總量（B1,B2,G1,G2）時的樣（yàng）品前處理。

柱容量：≥200ng

回收率：≥85%

【試驗原理】

本產品的測定的基礎是抗原抗體反應，黃曲黴毒素（sù）單克隆抗（kàng）體連接在柱內凝膠上，樣品中（zhōng）的（de）黃曲黴毒（dú）素經過提取、過濾、稀釋，然後（hòu）將樣品提取液緩慢的通過（guò）黃曲黴毒素免疫（yì）親和層析柱，在免疫親和柱內，毒素與抗體結合，之（zhī）後洗滌免疫親和柱除去沒有被結合的其他物質。用（yòng）甲醇洗脫黃曲黴毒素（sù），然後注入到分（fèn）析儀器中（zhōng）用於檢測。

【包裝組成】

根據不（bú）同規格，每一個（gè）盒中包含5-25支黃曲黴毒素（sù）免（miǎn）疫親和層析柱及1份說明（míng）書。

【需（xū）要而未提供的設備及試劑】

設備（bèi）：

┅┅高速均質器或組織（zhī）勻漿機

┅┅粉碎機

┅┅200ml/50ml量（liàng）筒

┅┅天平：感量0.1g

┅┅微量（liàng）移（yí）液器（qì）：單道 100l～1000l

┅┅槽紋濾紙（折疊快速定性或定量（liàng）濾紙）

┅┅玻璃微纖（xiān）維濾紙（zhǐ）（1.5m孔徑（jìng））

┅┅50ml漏鬥

┅┅一次性玻璃（lí）試管

┅┅泵流操作架（包括空氣泵，不同容積的玻璃注射器等）

試劑：

┅┅甲醇（色譜級）

┅┅蒸餾水或去離子水

┅┅pH7.0磷酸鹽（yán）緩衝溶液（PBS）：稱取8.0g氯化（huà）鈉，1.2g磷（lín）酸氫二鈉，0.2g磷酸二氫（qīng）鉀，0.2g氯化鉀，用990mL純（chún）水溶解，然後用濃鹽酸（suān）調節pH值至（zhì）7.0，最（zuì）後用純水稀釋至1000mL

┅┅吐溫-20/PBS溶液（0.1%）：取1mL吐（tǔ）溫-20，加入PBS緩衝溶液並定容至1000mL

【試（shì）劑配製】

樣品提取液：根據不同的樣品配置不同濃度的甲醇水（shuǐ）溶液，作為樣品提取液。

【樣本處理（lǐ）步驟】

（一）花生，玉米，大米，小麥及其製品，植物油（yóu）脂和飼料

┅┅取25g粉碎的樣品（植（zhí）物（wù）油脂（zhī）直接取樣（yàng），無（wú）需處理）與125mL甲醇-水（7：3）溶液混合；

┅┅加入5.0g氯化鈉以均質器高速攪拌，提取2分鍾；

┅┅4000r/min離心5min或用槽紋濾紙過濾；

┅┅取15mL濾（lǜ）液並加入30mL水稀釋（shì），用玻璃微纖維濾紙過濾（lǜ）

┅┅取稀釋後液體待（dài）測；

┅┅將免疫親（qīn）和柱連接於20.0mL玻璃注射器下。準確移取15.0mL樣品提取液注入玻璃注射器；

┅┅將空氣壓力泵與玻璃（lí）注射器（qì）連接，調節壓力（lì）使溶液以約6mL/min流速緩（huǎn）慢通過免疫（yì）親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體；

┅┅以10.0mL水淋洗柱子2次，棄去全部流出液，並使2mL~3mL空氣通過柱體；

┅┅準確加入1.0mL色譜（pǔ）級甲醇洗脫，流速（sù）為1 mL/min ~2mL/min，收集全部（bù）洗脫液（yè）於玻璃試管中（zhōng），供檢測用。

（二）醬油

┅┅取50g試樣與100mL甲醇-水（8：2）溶液混合；

┅┅加入2.5g氯化鈉以均質器高速攪拌，提取1分（fèn）鍾；

┅┅4000r/min離心5min或用槽（cáo）紋濾紙過濾；

┅┅取10mL濾液並加入（rù）40mL水稀釋，用（yòng）玻璃微纖（xiān）維濾紙過濾

┅┅取稀釋後液體待測；

┅┅將免疫親和（hé）柱（zhù）連接於10.0mL玻璃注射器下。準確移取10.0mL樣品提取液注入玻璃注射器；

┅┅將空氣壓力泵（bèng）與玻璃注射器連接，調節壓力使溶液以約6mL/min流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空（kōng）氣通過柱體；

┅┅用10.0mL 0.1%的吐溫/PBS清洗，再以10.0mL水淋洗柱子（zǐ）2次，棄去全部流出液，並使2mL~3mL空氣通過柱體；

┅┅準確加入（rù）1.0mL色譜級甲醇洗脫，流速為1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脫液於玻璃試（shì）管中，供檢測用。

（三）食醋

┅┅取5g試樣，加入1.0g氯化鈉；

┅┅以pH7.0磷酸（suān）鹽緩衝溶液稀釋定容至25.0mL；

┅┅4000r/min離心5min或用槽紋濾紙過濾；

┅┅取10mL濾液並加入10mL水稀（xī）釋，用玻璃微纖維濾紙過（guò）濾

┅┅取稀釋後液體待測。

┅┅將免（miǎn）疫親和柱連接於10.0mL玻璃（lí）注射器下。準確移取10.0mL樣品提取液注入玻璃注射器；

┅┅將空（kōng）氣壓力泵與玻璃注射器連（lián）接，調節壓力（lì）使溶液以約6mL/min流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通（tōng）過柱體；

┅┅用10.0mL 0.1%的吐溫（wēn）/PBS清洗，再以10.0mL水淋洗柱子2次，棄（qì）去全部流出液，並（bìng）使2mL~3mL空氣通過柱體；

┅┅準確加入1.0mL色譜級甲醇洗（xǐ）脫，流（liú）速為1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脫液於玻璃試管中，供檢（jiǎn）測用（yòng）。

【結果判定】

經免疫親和柱淨化後，收集到（dào）的甲醇洗（xǐ）脫液可直接使用熒光計或者HPLC檢測，也（yě）可使用（yòng）薄（báo）層色譜或者酶聯（lián）免（miǎn）疫（yì）試劑盒進行檢測。收集到的1mL洗脫液中的黃（huáng）曲黴毒素含量相（xiàng）當於1g樣品中黃曲黴毒素含量。

【高效液相參考譜圖】

【注意事項】

┅┅黃曲黴毒素危害極大，應戴手套操（cāo）作。

┅┅使用過的玻璃容器及（jí）黃曲黴毒素溶（róng）液最（zuì）好（hǎo）用5%濃度的次氯酸鈉溶液浸泡過（guò）夜。

┅┅不要（yào）使用過了有效日期（qī）的免疫親和柱。

【貯藏條件及保存（cún）期】

貯藏條件：親和柱可於常溫保存，2-8℃儲存可（kě）延長有效期，不可凍存

保存期：該（gāi）產品有效期為12個月。