【操作】

進行培養時，動作要準確敏捷，但（dàn）又不必太快，以防（fáng）空（kōng）氣流動，增（zēng）加汙染機會。不能用手觸及已消毒器皿，如（rú）已接觸，要用火焰燒灼消（xiāo）毒或取備品更（gèng）換。為拿（ná）取方便，工作台麵上的用品要有合理的布（bù）局，原則上應是右（yòu）手使用的東西放置在右側，左手（shǒu）用品在左（zuǒ）側，酒精燈置於中央。工作（zuò）由始至終（zhōng）要保持一定順序性，組（zǔ）織或（huò）細胞在（zài）未做處理之前，勿過早暴露在空（kōng）氣中。同（tóng）樣，培養液在未用前，不要過早（zǎo）開瓶；用過之後如不再重複使用，應立即封閉瓶口直立可增加落（luò）菌機會。吸取營養液、PBS、細（xì）胞懸液及其它（tā）各種用液時，均（jun1）應分別使用吸管，不（bú）能混用，以防擴大（dà）汙染（rǎn）或導（dǎo）致細胞交叉汙染。工作（zuò）中不能麵向操作野講話（huà）或咳嗽，以免唾沫把細菌（jun1）或支原（yuán）體（tǐ）帶入工（gōng）作台麵發生汙染（rǎn）。操作前用酒精擦拭超淨台麵及雙手。手或相對較髒的物品（pǐn）不能經過開放的瓶口上（shàng）方，瓶（píng）口最易汙染，加液（yè）時如吸管尖碰到瓶口，則應將吸管丟掉。

【培養前準備】

在開始實驗前要製定好實驗計（jì）劃和操作程序。有關數據的（de）計算要事先做好。根（gēn）據實驗要求，準備各種所需器材和（hé）物品、清點無誤後將其放置操作場所（培養室、超淨台）內，然後開始消毒。這可以避免開始實驗後．囚物品（pǐn）不全往返拿取而增加汙染機會（huì）。

【操作野消毒】

無菌培養室每天都要用0.2%的新（xīn）潔爾滅拖洗地麵—次（拖布要專用）．紫外線照射消毒30-50min，超淨工作台台麵每次（cì）實驗前要用75％酒精擦洗。然後紫外線淌毒30min。在工作台麵消毒時切勿將培養細胞（bāo）和培養用液同時照射紫外線，消毒時工作台麵上用品不（bú）要過多或重疊（dié）放置．否則會遮擋射線降低消（xiāo）毒（dú）效果。—些操作用具如移液器、廢液缸、汙物盒、試管架等用75%酒精擦洗後置（zhì）於台（tái）內同（tóng）時紫外線消毒。

體外（wài）培養（yǎng）細胞缺乏抗感染能力（lì），所以防止汙染是決定培養成功或失敗的首要條件。即便使用設備完善的實驗室。若實驗者（zhě）粗心大意，技術操作不規範,也會導致汙染。因而．為在一切（qiē）操作中為（wéi）最大可能的保證無菌．每一項工作（zuò）都（dōu）必須做到有條不紊和完全靠（kào）。

【洗手（shǒu）和著裝（zhuāng）】

原則上和外科手術相同。平時（shí）僅做觀察不做培養操作時，可穿裝細胞（bāo）培養室內紫外線照射30min的清潔工作（zuò）服。在利用（yòng）超淨台（tái）工作時，因整個前臂要伸入箱內，應（yīng）著長袖（xiù）的清（qīng）潔工（gōng）作服，並於開始操作前要用75％酒精消毒（dú）手。如果實驗過程中手觸及可能汙（wū）染的物品和出入培養室都要重新用消毒液洗手。進入（rù）原代培養室需徹底（dǐ）洗（xǐ）手還要（yào）戴口罩（zhào）、著消毒衣帽。

【火焰消毒】

在無菌環（huán）境進行培養或做其它無菌工作時，首先要點燃酒精燈或（huò）煤氣燈。以後一切操作，如按裝吸管帽、打開或封閉瓶口等，都需在火焰近處並經過燒（shāo）灼進行。但（dàn）要注意：金屬器械不能在為焰中燒的時間過長，以防退火，燒過的金屬鑷要待冷（lěng）卻後才能挾取組織，以免（miǎn）造成組織損傷。吸取過營養液後的吸管不能再用火焰燒灼（zhuó），因殘留在吸管頭中營養液能燒焦形（xíng）成炭膜，再用時會把有害物帶入營養液（yè）中。開啟、關閉長有細胞的培（péi）養瓶時，火焰滅菌（jun1）時間要短（duǎn）。防止因溫度過高（gāo）燒死（sǐ）細胞。另外膠塞過火（huǒ）焰時也不能時間長，以（yǐ）免燒（shāo）焦產生有毒氣體，危害培養細胞。

本文關鍵詞：無菌操作注意事項