【培養前準備】

在開始實驗前要製定好實驗計劃和（hé）操（cāo）作程序。有關數（shù）據的計算要事先做好。根據實驗（yàn）要（yào）求，準（zhǔn）備各種（zhǒng）所需器材和（hé）物品、清點無（wú）誤後將其放置操作場所（suǒ）（培養室、超淨台（tái））內，然後（hòu）開始消毒。這可以（yǐ）避免開始實驗（yàn）後．囚物品不（bú）全往返拿取而增加汙染機會。

【操作野消毒】

無菌培養室每天都要用0.2%的新潔爾滅拖洗地麵—次（cì）（拖布要專（zhuān）用）．紫外線照射消毒30-50min，超淨工作（zuò）台台麵（miàn）每（měi）次實驗前要用75％酒精擦洗（xǐ）。然後紫外線淌毒30min。在工作台麵消毒時切勿將（jiāng）培養細胞和培養用液同時（shí）照射（shè）紫外線，消毒（dú）時工作台麵上用品不要過多或重疊放置．否（fǒu）則（zé）會遮擋射線降低消毒效果。—些（xiē）操作用具如移液器、廢（fèi）液缸（gāng）、汙物盒、試管（guǎn）架等（děng）用（yòng）75%酒精擦洗後置於台內同時紫外線消毒（dú）。

體外培養細胞缺乏抗感染能力，所以防止汙染是決定培養成功或失敗的（de）首（shǒu）要條件（jiàn）。即便使用設備完善（shàn）的實驗室。若實驗者粗心大（dà）意，技（jì）術操作不規範,也會導致汙（wū）染。因而（ér）．為在一切操作（zuò）中為最大可能的（de）保證無菌．每一項工作都必須做到有條不紊和完全靠。

【洗手和著裝】

原則上和外科手術相同。平時僅做觀察不（bú）做培養操作時，可穿裝細胞培養室內紫外（wài）線照射30min的清潔工作服（fú）。在利（lì）用超（chāo）淨台工作時，因（yīn）整個前臂要伸入箱（xiāng）內（nèi），應著長袖的清潔工作（zuò）服，並於開始操作前要用75％酒精消毒手。如果實驗過程中手觸及可能（néng）汙染的（de）物品和出入培養室都要重新用消毒液洗手。進入原代培養（yǎng）室需徹底洗手還要戴口罩、著消毒（dú）衣帽。

【火焰消毒】

在（zài）無菌環境進行培養或做其它無菌工作時，首先要點燃酒精燈或煤氣燈（dēng）。以後一切操作，如按裝吸管帽、打開或封閉瓶口等，都需在火焰近處並經過燒灼進行。但要注意（yì）：金屬器械不能在為焰中燒的時間過長，以防退火（huǒ），燒過的金屬鑷要待冷卻後才能挾取組織，以免造成組織（zhī）損傷。吸（xī）取過營養液後的吸管不能再（zài）用火焰燒灼，因殘留（liú）在（zài）吸管（guǎn）頭中營養液能燒焦形成炭膜，再用（yòng）時會把有害物帶入營養液中（zhōng）。開啟（qǐ）、關閉長有細胞的培養瓶時，火焰滅（miè）菌時間要短（duǎn）。防止因溫（wēn）度過高燒死細胞。另外膠塞（sāi）過（guò）火焰時也不能時（shí）間長（zhǎng），以免燒（shāo）焦產生（shēng）有毒氣（qì）體，危害培養細胞。

【操作】

進行培養（yǎng）時，動（dòng）作要準（zhǔn）確敏捷，但又（yòu）不必太快，以防空氣（qì）流動，增加汙染機會。不能用手觸及已消毒器皿，如已接觸，要用火焰燒灼消毒或取備品（pǐn）更（gèng）換。為拿取方便，工作台麵（miàn）上的用品要（yào）有合理的布局，原則上應（yīng）是右手使用的東（dōng）西放置在右側，左手用品在左側，酒精（jīng）燈置於中央。工作由始至終要保持一定順序性，組織或細胞在未做處理（lǐ）之前，勿過早暴露在空氣中（zhōng）。同樣，培養液在未（wèi）用前，不要過早開瓶；用過之後如不再重複使用，應立（lì）即（jí）封閉瓶口直立可增（zēng）加落菌機（jī）會。吸取營養液、PBS、細胞懸液（yè）及其它各種用液時，均應分別使用吸管，不能混用，以防擴大（dà）汙染或導致細胞交叉汙染。工（gōng）作中不（bú）能麵向操（cāo）作野講話或咳嗽（sòu），以免唾沫把細菌或支原體帶入工（gōng）作台麵（miàn）發生汙（wū）染。操作前用酒（jiǔ）精擦（cā）拭超淨台麵及雙手。手或（huò）相對較髒（zāng）的物（wù）品不能經過開（kāi）放的瓶口上方，瓶口最易汙染，加液時如吸管尖碰到瓶口，則應將吸（xī）管丟掉。

本文關（guān）鍵詞：無菌（jun1）操（cāo）作的注意事項