測定原理：

待（dài）測天然含氮有機物與濃硫酸共熱時，被氧化成為二氧化碳和水（shuǐ），而氮轉變成氨，氨再與硫酸結（jié）合生成硫（liú）酸銨。為了（le）加速有機物質（zhì）的分解反應，在消化時常（cháng）加入促進劑，硫酸銅（tóng）可（kě）用作催化（huà）劑，硫酸鉀或硫酸（suān）鈉可提高消化液的沸（fèi）點（diǎn），氧化劑（jì）如過氧化氫也能加速反應。

操作方（fāng）法：樣品處理 測定（dìng）某一固體樣品中蛋白質的含量都是按（àn）100克物質的幹重中所含蛋白質的（de）克數來表示。因此在定氮前應先將固體樣品中的水分（fèn）除去。步驟：先將樣品磨細，在已稱重的稱量瓶中（zhōng）稱入一定（dìng）量樣品，然後置105度（100度無法除去非遊離水）的烘箱內幹燥（zào）2小時後稱重，以後每1小時再稱重，直至2次稱重數不變為止。

若（ruò）樣品（pǐn）屬於液體（tǐ）物質，可取一（yī）定體積經適當稀釋後，取一定量進行消化。

消化 根據樣品（pǐn）量的（de）多少（shǎo）選擇適（shì）宜的凱氏燒瓶4個（此（cǐ）處以50毫升為例），其中2個為對照（zhào）。向燒瓶內加入準確稱量的樣品，注意要把樣品加至（zhì）燒瓶（píng）底部，切勿沾在瓶口及瓶頸上。另外2個作空白對照，好對樣品進行校正。

在每個燒瓶中加入約300毫克硫酸（suān）鉀-硫酸銅混（hún）合物（硫酸鉀：五（wǔ）水硫（liú）酸銅（tóng）=3：1、6：1或（huò）10：1均可），再用量筒加（jiā）入3毫升（shēng）濃硫酸。將上述4個凱氏燒瓶放在通風良好處（最好在通風櫥中進行）加熱消化。先用小火加熱至（zhì）沸騰。此時會產生大量（liàng）泡沫，應特別注意（yì）不（bú）能讓黑色物質上升到燒瓶頸部，否則（zé）將嚴重影響分析結果。當混合物停止冒泡，蒸汽與二氧化硫也（yě）均勻地放出時，將火焰調節到保持瓶內液體微微沸騰。假若發現瓶頸上有黑色顆（kē）粒，應小心地將（jiāng）燒瓶傾斜振搖，用消化液將其洗下。在消（xiāo）化過程（chéng）中（zhōng）要時常轉動燒瓶，使全部樣品都浸在消化液中。當（dāng）消化液呈清澈淡藍色時即告消化結束。時間一般在5~6小時！若樣品中含賴氨酸（suān）或組氨酸較多時，消化時間需要延長1~2倍。因為這兩種氨基酸中的氮（dàn）在短時（shí）間內不易消化完全。

蒸餾 采用改良式凱氏定（dìng）氮儀。

1、洗滌蒸餾儀：用硼酸指示劑（取100毫升2%硼酸溶（róng）液，滴加混合指示劑約1毫（háo）升，搖勻後（hòu）呈紫紅（hóng）色即可（kě）；混合指示劑：50毫（háo）升（shēng）0.1%甲烯藍乙醇+200毫升0.1%甲（jiǎ）基紅乙醇，存於棕色瓶中）檢（jiǎn）測是否清洗（xǐ）幹淨（jìng）。幹淨標準：指示劑不變（biàn）色。

2、樣品（pǐn）和空白的蒸餾：取2毫升稀釋消化（huà）液至（zhì）加樣口（kǒu）加入（rù）反應室（shì），關閉（bì）加樣口，另取1個裝硼酸指示劑的三角瓶接（jiē）於冷凝管下端。取30%氫氧化鈉（W/W）溶液（yè）約10毫升，從加樣口緩慢加入，當未加完時關閉，並加入約3毫升蒸餾水（shuǐ），再繼續緩慢加入一半後關閉，讓剩下（xià）的水作液（yè）封。將（jiāng）加熱器重新放在蒸汽發（fā）生器下加熱（注：在清洗儀器完畢後應拿走加熱器），待（dài）三角瓶中液體由紫紅變成鮮綠色起開始（shǐ）計時，蒸餾5分鍾，然後移動三角瓶使液麵離開冷凝管口約1厘米，並用少量蒸餾水洗滌冷（lěng）凝管口外周，繼（jì）續蒸餾1分鍾。空白同（tóng）樣。

3、清洗儀（yí）器：同上，不必用指示劑。

滴定 用0.0100mol/L標準（zhǔn）鹽酸（suān）（要標定（dìng），費時）滴定三角瓶中收集的氨，直至硼酸指示劑由綠變紫紅。

注意：蒸餾時試驗室（shì）環境中切忌（jì）有堿性霧氣（qì），否則要影響分析精度。

本文關鍵詞：凱式定氮法