1.  為什麽免疫後沒有效價或免疫後效（xiào）價低？

答：可（kě）以（yǐ）從這幾個方麵一一考慮（lǜ）：

（1）設（shè）計的（de）抗原與被免疫的動物（wù）內源蛋白有極高的同源性或者抗原是免疫原性極差（chà）的小分子物質。對於前一種情況應該（gāi）重新設計抗（kàng）原，設計抗原時盡量選取目標蛋白特異性的序列（liè），可以設計為短肽然後再與載體蛋白偶聯之後免疫；對於（yú）後一（yī）種情況，首先確認小分子物質是否已經正確地和載體（tǐ）蛋白偶（ǒu）聯，如果偶聯沒有問題，可以更換其它（tā）的（de）載體蛋白，一般來說KLH是所有載（zǎi）體（tǐ）中較為優先考慮的蛋白。

（2）免疫的周期不正確。免疫周（zhōu）期過長或過短，各免疫步驟之間的間隔過長或（huò）過短都有可能影響免疫效果，詳細請參考（kǎo）本站有關動物免疫的部份，實際操作中的相關程序與本站推薦的（de）程序相（xiàng）差盡裏不超過50%的偏差。

（3）免（miǎn）疫佐劑不合適（shì）。TiterMax等佐劑在免疫時，對於某些（xiē）抗（kàng）原可能效果（guǒ）不佳，弗低佐劑也不能保證完全有效，此時可以考慮更（gèng）換佐劑嚐試。

（4）免疫劑量不合理（lǐ）。過大（dà）的免疫劑（jì）量可能導致免疫耐受，過少的免疫劑量可能無法激（jī）活免疫應答。一般來說，實際免疫劑量與本站（zhàn）所推薦的劑（jì）量不要相差兩倍以上。

（5）免疫（yì）途（tú）徑不合理。對於有些免疫原性弱的抗原，可以考慮脾內免疫方（fāng）法，具體操作（zuò）本站上也有詳細的講解。

（6）測效價的過程存（cún）在錯誤操作，尤其（qí）考慮包被是否成功（gōng）或（huò）二抗（kàng）使用是否正確。同時，一抗（即血清）稀釋梯度（dù）盡量放寬（kuān），一般（bān）建議（yì）從1：500或1：1000開（kāi）始作梯度稀（xī）釋。對於（yú）小分子（zǐ）物質，效價達到1：2000仍可視為免疫成功。

2.  為什麽融合後細胞不長或者融合後（hòu）克隆很少？

答：可以（yǐ）從這幾個方麵考慮：

（1）免（miǎn）疫用的動物品係不正確或者品係不純。免疫用的動物一般應該與骨髓（suǐ）瘤來源的動物是（shì）相同品係，例如使用SP2/0骨髓瘤（liú）細胞（bāo）時應該選（xuǎn）用Balb/C小鼠，同時必須使用品係純正的小鼠。

（2）培養基中加入了過高濃度的HAT，或者僅A的濃度過高或（huò）HT的濃（nóng）度過（guò）低，建議用純的骨（gǔ）髓瘤和已有的雜（zá）交（jiāo）瘤作HAT濃度篩選。

（3）培養基不正確或（huò）血清濃度不正確或使用了劣（liè）質血清。

（4）未正確（què）製備（bèi）飼養層細胞。參見（jiàn）本（běn）站有關飼養層細胞製（zhì）備的（de）部份。

（5）接種雜交瘤細胞的培養板過多。一般在5-20塊96孔板（bǎn）為宜。

（6）融合後，未及時轉移或稀釋細胞。有人在做融合後喜歡把融合（hé）的細胞先放在培養瓶中培養，然後再滴到96孔板上。如果在培養瓶中培（péi）養的時間過長，也（yě）可能出現克隆利（lì）率（lǜ）少的情況。

（7）細胞被汙染。在顯微（wēi）鏡（jìng）下仔細觀察是否有明顯的微生物汙染。即使（shǐ）看（kàn）不到有明顯的微生物，也（yě）應該考慮是否有支（zhī）原體汙染，有條件的可以做支原體檢測。

（8）細胞培養條件不正確，確保細（xì）胞培養在恒定的37度（dù）較濕的（de）環境（jìng），同時保證CO2濃度在4-5%左右。

（9）其它與融合條件相關的不恰當的因素。詳見本站有關細胞融合的（de）部份。

3.  為什麽融合後得不到陽性克隆？

答：可能的原因：

（1）動物（wù）未免疫成功（gōng）就進行了融合。具體（tǐ）解決方法參照（zhào）本頁麵第1個問題。

（2）融合後得（dé）到的克隆較少，故得到陽性克隆的機率也較小。具體解決方法，請參照本頁麵第（dì）2個問題。

（3）篩選克隆手段不正確。例如有些小（xiǎo）分子物質不可以直接包被到酶標板上，再如使用（yòng）了不適當的二抗等（děng）諸多因素，也有人直接不使用ELISA作為篩選方法（fǎ）的，成功率也有待商（shāng）榷。

（4）抗（kàng）原成份與細胞培養條件中的物質相（xiàng）同或類似，或者與篩選過程中有同抗原結構相同或類似的物質產生了競爭反應。舉個簡單的例子，如（rú）果需要製備抗BSA 的（de）單抗，則（zé）養雜交瘤的培養基中不可以使（shǐ）用牛血清，否則牛血清中的BSA直接與抗體相結合，最（zuì）後做（zuò）ELISA篩（shāi）選的（de）時候無法（fǎ）得到陽性結果。解決的辦法隻有使用其它（tā）的動物的血清或者使用無血清培養基。再如，如（rú）果需要製備酪蛋白的單抗，則做ELISA篩選時，二抗的稀（xī）釋液不（bú）可以使用（yòng）脫脂奶粉。

（5）其它所有能（néng）影響ELISA等（děng）相關篩選手段的因素（sù）。這一部份詳見本站有關ELISA實驗的（de）講解與（yǔ）討論。

4.  為什麽（me）我的細胞生長很慢？

答：可能（néng）的原因：

（1）使用了劣質的培養耗材、培養基、血清、HAT或HT。建議新手使用（yòng）知名（míng）廠商的試劑或耗材（cái）。對於血清，可能需要從（cóng）多個廠（chǎng）家選用多個批次試用，選（xuǎn）擇出比（bǐ）較好的批次進行實驗。在（zài）試用血清的時候，一般可以使（shǐ）用相對較低濃度的血清進行骨髓瘤細胞培（péi）養實驗，根據骨髓瘤（liú）細胞的倍增速度確實血清質量。

（2）使用的血清或培養基濃度（dù）不正確。仔細檢查配方是否正確。

（3）製備飼養層的方法不正確。參見本頁麵第二個問題。

（4）其它問題，可以參考本頁麵第二個問題。

5.  我的克隆原來是陽性的，為什麽後來轉為陰性了？

答（dá）：首先要注意（yì）的是，正常情況（kuàng）下，雜交瘤也（yě）不是絕對穩（wěn）定的，確實容易發生染色體丟失的情（qíng）況，尤其是當細胞移到新環境中生長，如從小孔擴大到（dào）大（dà）孔，或者複蘇操作時（shí），更容易發生陽性變為陰性。但是也有一些（xiē）辦法盡量減少陽性變為陰性的辦法。一般可以從這幾個方麵加以注意：

（1）永遠保證細胞（bāo）處在最佳的生長（zhǎng）環境中。尤（yóu）其是培養基不能長期不換，一般來說，當細（xì）胞增長到一定密度的時候，培養基（jī）就開（kāi）始變顏色（sè），這個時候就要準備換培養基了，除了換培養基，同時應該控製（zhì）好細胞的密度，可以吹走過多的細胞，使新加入的培（péi）養基不至（zhì）於很快被消耗。

（2）對於重要的（de）細胞株，每一步都把陽（yáng）性的細胞（bāo）保種（zhǒng）。

（3）不要過於（yú）頻繁操（cāo）作細胞，當細胞生長密度不（bú）是很大的時候（hòu），不要頻繁操作，否則細（xì）胞容易出現死亡或者生長形（xíng）態發生明顯（xiǎn）變化。

（4）對於傳代次數較多的細胞（bāo）株需要經常進行亞克隆，並將每一（yī）次的亞克隆株也作凍（dòng）存。

（5）當（dāng）細胞被支原體等微生物汙染，也會發生由陽性轉為陰性的情況。

6.  為什麽我做亞克隆後長（zhǎng）不出克隆來？

答（dá）：亞克隆失敗的原因和克隆不長的原因類似，但是除此之（zhī）外，也還有一些獨特的原因。

（1）亞克隆時，原始孔裏（lǐ）的細胞狀態不好，經過（guò）有限稀釋或其它手段亞克（kè）隆的細胞活（huó）性很差，以至於長不出克隆。

（2)亞克隆時，沒有按照正確的數量取（qǔ）出細胞，在本站有關（guān）亞克隆操作的頁（yè）麵上提到過，亞克隆的過程服從泊鬆分布，如果取出的細胞遠遠（yuǎn）低於平均每孔一個細胞（bāo），或有效細（xì）胞遠遠低於平均每（měi）孔一個細胞，則也可（kě）能出現長不出克（kè）隆的結果。

（3）未添加飼養（yǎng）層（céng）細胞。單個細胞（bāo）在完全培養基中極難培養，如果不添加（jiā）飼養層細胞，則它們很可能很快就死亡，最終就長不出克隆。

（4）使用的HAT中HT失效或A的（de）濃度過高，或（huò）者未添加HT。 雖然HT對（duì）雜（zá）交瘤的生長並不是必須的，但是HT確實可（kě）以加快細胞生（shēng）長，改善細胞生長（zhǎng）狀態。

（5）使用無血清培養基。這（zhè）一點（diǎn）是很冷僻的（de）一個因素。雖然（rán）很少有人使用無血清培養基製備單抗，但是在某些血（xuè）清可能幹預（yù）篩（shāi）選步驟的實驗的時（shí）候，可能會選用無血清培養基來培養雜交瘤，但是需要注意的是（shì），在很多種無血清（qīng）培養基（jī）中（zhōng），單個細胞是很難長成克隆的。最好的解決辦法就是先用含有（yǒu）血清（qīng）的培養基培養它們，等克隆長出後（hòu）再把培養基徹底更換（huàn）為無血清培養（yǎng）基。

7.  為什麽我凍存的細胞很難複蘇或者複蘇不活？

答：這個問題要從兩個（gè）方麵來回（huí）答，一是凍存方麵，二是複蘇問題。 對於凍存過程，需要注（zhù）意：

（1）凍存液的（de）配方。這個問題很關鍵，一個良好的凍存液配方可以（yǐ）使（shǐ）細（xì）胞保存得非常好，而一個不好的凍存液配方可能會讓細胞傾刻死亡。目前認為比較好（hǎo）的配方有：10%DMSO+90%胎牛（niú）血（xuè）清和10%DMSO+90%養過雜交瘤的培養基，不管是哪一種，凍（dòng）存保護（hù）劑DMSO的含量非常重要，如果這個濃（nóng）度過低，則起（qǐ）不到（dào）保護作用，凍存的細胞（bāo）最終會死（sǐ）於冰晶形成時的張力（lì），如果濃度過（guò）高，則細胞中毒而亡。如果使用第二個配（pèi）方，注意一定要用養過雜交瘤的培養基，而盡量不要用一般（bān）的完全培養基，而且一定是（shì）配養需要凍存的那一株的培養基。文獻（xiàn）中也有提到用甘油作為（wéi）凍存保護劑的（de），站長自己（jǐ）沒（méi）有親自試（shì）過，不發表評論。如（rú）果新手確實對（duì）這個沒把握，市場上也有商品（pǐn）化的凍存液，買回來按（àn）照說明（míng）書操作就OK了。

（2）凍存過程中，不可用力過大，在凍存液中重懸細胞的時候更是要（yào）輕柔（róu），因為在DMSO存（cún）在的（de）條件下，細胞膜變得（dé）非常脆弱，如果用力過猛，則細胞膜很容（róng）易破，複蘇成活的機會就明顯會（huì）下降。

（3）凍存的程序也非常重（chóng）要。實踐表明，以每分鍾1 ℃的速度下降凍存細（xì）胞是（shì）最理想的。如果條件簡易，可以把細胞放在4 ℃半小（xiǎo）時左右，然後再在-20 ℃放置1-2小時，最後轉入-80 ℃放置（zhì）過夜，最終轉入液氮保存。需要短期（qī）保存的，直接放-80 ℃也（yě）行。現在市場上有比較貴的凍存盒，把需要存放的細胞放進去，然後直接放-80 ℃就行，等（děng）時間夠長後（hòu）直接轉至液氮（dàn）中即可。

（4）細胞需要保存在液氮的氣相中（zhōng），而不是泡在液（yè）相裏。否（fǒu）則液氮很容（róng）易進入凍存管。這一點很多（duō）人都沒有注意，大部份人都是直接往液相（xiàng）裏放，其實這是錯誤的。有人認為，普通的液氮中可能含有微生物或者孢子什麽（me）的，如（rú）果（guǒ）放在（zài）液相中，這些微生物或孢子就有機會進入凍存管，最終可能造成細胞汙染（rǎn）。

（5）保證被凍存的細胞（bāo）處（chù）於良好（hǎo）的生長狀態，並且沒（méi）有被汙染。

對於複蘇過程，需要注意：

（1）快速。為了防止升溫中細胞內產生冰晶，強烈建議加快融（róng）化過程。一般（bān）都要用用足夠體積的37 ℃熱水複蘇，並（bìng）不斷晃動凍存管。

（2）複蘇過程不要把（bǎ）凍存管全部泡入（rù）水中，也不要把蓋子弄濕，否則熱水有可能汙染管口，造成複蘇的細胞被汙染（rǎn）。

（3）有的人複（fù）蘇細胞時，沒有去掉凍（dòng）存液，這樣就把凍存液裏的DMSO帶到了新的培養體係裏，容易對細胞造成毒害，因此強烈建議將融化的細胞（bāo）離心後去掉凍存液（yè），然後用新的完全培養基重懸，再接種到新的容器（qì）內培（péi）養。

8.  為什麽（me）我的細胞總是汙染？如何（hé）可以救（jiù）活汙染（rǎn）的細胞（bāo）？

答：養細胞出現汙染，幾乎是每個細胞培（péi）養技術（shù）員容易出現的問題。要防止細胞汙染，無非就是保證培（péi）養環境無汙染，保證所用的所有試劑都無汙染源，同時提（tí）高操作時的警惕（tì）性，這些基本的知識這裏就不再廢話了。下（xià）麵講一講如（rú）何挽救一株已經被汙染（rǎn）的（de）細胞株。

（1）體（tǐ）外用抗生素消滅。一般來說，一旦發現細胞（bāo）被微生物汙染，應該（gāi）馬上進行處理，也許還有一線挽救的機會。 但是這種挽救不是盲目（mù）的，首先應該決斷是哪一類生物造成的汙染。細胞的（de）汙染大致可（kě）以分三類：細菌汙染、真（zhēn）菌汙（wū）染和支原體汙染。 在顯微（wēi）鏡下仔細觀察，這三種微生（shēng）物汙染區別（bié）還是比較（jiào）明顯的：如果有（yǒu）大量運動的微生物（wù），且形態較大，輪廓清晰可（kě）見，呈較大幅度運動，並且培養基在短時間內變酸，則很（hěn）可能是細菌汙染；如果（guǒ）在顯微鏡下觀察有典型的斑（bān）狀或（huò）絲狀微生物（注（zhù）意與塑料屑、棉花屑和琉璃纖維區別開），基本上看不到明顯的（de）運動，則很可能是真菌汙染；如果看不到明顯的微生物，並且培養基沒有明顯（xiǎn）的顏色上的變化，而細胞狀態很差，細胞邊緣（yuán）極其不光滑（huá），而且細胞又莫名其（qí）妙地（dì）死亡或生長極其緩（huǎn）慢，則有可能為支原體汙染，但不能下明確的結論，如果非常需要知道是否為支原體汙染可以使（shǐ）用相關的試劑盒進行檢測。 對於細菌或真（zhēn）菌的汙染，可以先把細胞收集起來，用幹淨的培養基洗滌離心，交替（tì）進行幾次，再把洗幹淨的細胞放在新的培養板或培養瓶等（děng）容器內，加高濃度的抗生素培養（yǎng），同時強烈（liè）建議加入（rù）小鼠腹腔巨噬細胞作為飼養層，以輔助消除微生物。對於細菌汙染，可以把青黴素的濃度提高至10倍左右，鏈黴素濃度提高至5-10 倍，也（yě）可以用10倍濃度的卡那黴素替代鏈黴素。 對於真（zhēn）菌（jun1）汙染，可以在培養基中加入約5 ug/ml的咪康唑（注射用達克寧）抑製。 對於這（zhè）兩種（zhǒng）情況的汙染，采用（yòng）上述方法處理後（hòu），待細胞（bāo）稍有好轉，並（bìng）且沒有發現更大規模的汙染時，需要盡快重複上麵（miàn）的處理步驟。需要注（zhù）意的是，此時細胞生（shēng）長受（shòu）抗生素的影響比較大（dà）故而生長很慢。如果多次傳代均（jun1）未（wèi）發現汙染複發，可以慢慢降低抗生素濃度直至（zhì）常規濃度，確定是否完全根除汙染。最（zuì）好進行一次有限稀釋的亞克隆操作，以獲得更加純淨的細（xì）胞株。 而對於支原（yuán）體汙染，則比較（jiào）麻煩，一般（bān）的抗生素是很（hěn）難解決的，對於輕度的汙染，可以試試使用（yòng）60 ug/ml的泰樂菌素（sù）和10 ug/ml左右的環丙（bǐng）沙星交替處理。如果得到明顯的緩解，建議馬上做亞克隆（lóng）操作，看看是否得到汙染根除的細胞株（zhū），如（rú）果（guǒ）此方（fāng）法無效（xiào），則不能單（dān）純利用抗生素來解決汙染問題。

（2）體內法（fǎ）。這個（gè）辦法很簡（jiǎn）單，原理就是動物體有強大的免疫係統，一般的微生物都可以被動物體消滅。具體（tǐ）操作和（hé）製備腹水的方法完全一樣，即先用IFA或石蠟製敏小鼠，數天後腹腔注射汙（wū）染的雜交瘤。如果情況緊急，致敏當天注射雜交瘤也（yě）行。一般十天後小（xiǎo）鼠產生腹水，在超淨台無菌采出腹水，其中即含有大量（liàng）的雜交（jiāo）瘤細胞，一般是可（kě）以除掉汙（wū）染的微生物的（de）。也可以在小鼠背部注射雜交瘤，十幾天後可以看到實體瘤形成，也（yě）可（kě）以在超（chāo）淨台上無菌采摘，然後放回培養板或培養瓶等容（róng）器內培養。如（rú）果被汙染的細胞很少，比（bǐ）如（rú）說在96孔板上就被汙染了，這時候不能進行腹腔注射，也不要進行皮（pí）下注射，否則細胞很容易被老鼠（shǔ）的免疫係統攻擊而死（sǐ）亡的，最好的辦法是采用脾內注射的方法進（jìn）行，同時在腹腔（qiāng）內用IFA或石蠟油致敏，十幾（jǐ）天後，同樣（yàng）可以形成（chéng）腹水，其（qí）中即含有幹淨的雜交瘤細胞。 如果擔心小鼠會（huì）受（shòu）到微生物感染，可以在（zài）培養基中先加入高濃（nóng）度的（de）抗生素（sù），然後連同抗生素一起（qǐ）注射到小鼠（shǔ）體內。

如果確（què）定細胞汙染極其嚴重，並且細胞已大麵積死亡（wáng），建議放棄，迅速做好環境清（qīng）潔工作，對細胞操作（zuò）間作徹底消毒，重新（xīn）做融合（hé）而獲得新的細胞株，不可因小失（shī）大造成其它的細胞也被汙染。

9.  為什麽（me）我（wǒ）的雜交瘤細胞不能製備腹水或（huò）者製備的腹水中沒（méi）的抗體（tǐ）或腹水沒有效價？

答： 不能製備腹水的原因大部份是人為的原因：

（1）致敏不正確，例如使（shǐ）用了不（bú）正（zhèng）確的致敏劑，或者致（zhì）敏時間與接種雜交瘤的時間相差太久。

（2）雜交瘤的接種位置不正確，沒有打到腹腔，而是打到了皮（pí）下（xià）。

（3）接種的雜（zá）交瘤細胞數量（liàng）太少或者細胞狀態不好。一般不應少於（yú）10萬個細胞，建議在100萬個細胞左右為（wéi）宜。

（4）製備腹（fù）水小鼠的種係與參與融合的細胞來源（yuán）的動物種係相（xiàng）差太遠，以至製備腹水的（de）小鼠對雜交瘤有強大的免疫反應將其（qí）殺死，建議更換小鼠品係重新接種。

對於腹水沒有效價（jià），可能的（de）原（yuán）因：

（1）製備腹水的雜交瘤極不穩定，打（dǎ）到小鼠身上之前就失去抗體分泌（mì）能力或者打到腹腔內就失去了（le）分泌能力。

（2）致敏（mǐn）小鼠時采用了錯誤的致敏劑，如使用了弗氏完全佐劑，這時即使不打雜交瘤，小鼠也會產生腹水。

（3)極其（qí）罕（hǎn）見的情況，就是此（cǐ）雜交瘤生產的抗體可（kě）以與小（xiǎo）鼠體內的分子相互作用，於是雜交瘤（liú）產生的抗體被小鼠（shǔ）的相關蛋白中和，這種情況（kuàng）下，小鼠的身體可（kě）能會出現明顯的異常。

（4）檢測腹水效價的實驗方案有問題，或者腹（fù）水（shuǐ）稀釋比過大。

10.  免（miǎn）疫失敗的可能原因及應采取的（de）措施

答（dá）：有時不能（néng）獲得滿意的抗血清，可從（cóng）下列幾方麵找原因，並改進之。

（1）免疫動物的種屬及品係是否合適，可考慮（lǜ）改變動物的種屬或品係，或擴大免疫動物的數量。

（2） 抗原質量是否良好，可改用其它廠家的產品或改用同一廠家的其它批號，也可考慮改變抗（kàng）原分子的部分結構，或改進提（tí）取方法。

（3） 製備的免疫原是否符合要求，可從偶聯劑，載體、抗原或載體的比例（lì）、反應時間等多方麵去考慮，並加以改進。

（4） 所用的佐劑是否合適，乳化是否完全，可改用其它佐劑，或加強乳化。

（5） 免疫的方（fāng）法、劑量，加強免疫的間隔時間和次數，免疫的途徑是否合適。

（6） 動物的飼養是否得當，如營養（飼料、飲水）、環境衛（wèi）生（通風（fēng）、采光、溫度）是否符合要求，動物的健康情況是否良好等。

11.  製備單克隆抗體影響因素（sù）、失敗原因分析

答：由於製備McAb的實驗周期長，環節多，所以影響因素（sù）就比較多，稍不注意就會造成失敗（bài）。 其主要失敗原因和影響因素有：

（1）汙染： 包（bāo）括細菌（jun1）、黴菌和支原體的汙染。這是雜交瘤工作中最辣手的問題。一旦發現有（yǒu）黴菌汙染就應及早（zǎo）將汙染板（bǎn）棄之，以免汙染整個培養環境（jìng）。支原體的汙染主要來源於牛血清，此外，其它添加劑、實驗室（shì）工作人員及環境也可能造成支原體汙染。在有條件的實驗室，要對每一批小牛血清和長（zhǎng）期傳代培養的細胞係進行支原體的檢查，查出汙染源應及時采取措（cuò）施處理（lǐ）。對（duì）於汙染的雜交瘤細胞可以采取生物學的（de）過濾方法，將汙染的雜交瘤細胞注射於BALB／c小鼠的腹腔，待長出腹水或實體瘤時，取出（chū）分離雜交瘤細胞，一般可除去支原體汙染。

（2）融（róng）合後雜交瘤不生長， 在保證（zhèng）融（róng）合技術沒有問題的前提下主要考慮下列因素：

PEG有毒性或作用時間（jiān）過長。

牛血清的（de）質量太差，用（yòng）前沒有進行嚴（yán）格（gé）的篩選。

骨髓瘤細胞（bāo）汙染了支原體。

HAT有問（wèn）題，主要是（shì）A含量（liàng）過高或HT含量不足。

（3）雜交瘤細胞不分（fèn）泌抗體或停止分泌抗體： 融合後有細胞生長，但無抗體產生，可能是HAT中A失效或骨髓瘤細胞發生突變，變成A抵抗細胞所致（zhì）。 有可能是免疫原抗原性弱，免（miǎn）疫效果不好。 對於原分泌抗體的雜交瘤細胞變為陰性（xìng），可能是細胞支（zhī）原體汙染，或非抗體分（fèn）泌細胞克隆競爭性生（shēng）長，從而 抑製了（le）抗體分泌細胞的生長。也可能發生染色體丟（diū）失。Goding91982）曾提出“三要”“三不要”，可能是防止抗（kàng）體停止分泌的（de）有效（xiào）措施。

三要：

要大量保持和補充液氮凍存的細胞原管。

要應用倒置顯微鏡經常檢查細胞的生長狀況。

要定期進行再（zài）克隆。

三不要（yào）：

不要讓細胞“過度生長”。因為非分泌的雜交瘤細胞將（jiāng）成為優勢，壓倒分泌抗體的雜交瘤（liú）細胞。

不要讓（ràng）培養（yǎng）物不（bú）加檢查地任其連續培養幾周或幾個月。

不要不經克隆化而使雜交瘤在機體內以腫瘤生長形式連續（xù）傳好幾代。

（4）雜交瘤細胞難以克隆化（huà）

可能與小牛血清質量、雜交瘤細胞的（de）活性狀態有（yǒu）關，或由於細胞（bāo）有支原體汙染，使克（kè）隆化難以成功。若是融合（hé）後的早（zǎo）期克隆化，應在（zài）培養液加HT。

本文關鍵詞：單抗製備常見問題分析