ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特（tè）點在臨床上得到了廣泛的應用，但操作中（zhōng）的各個環節對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花（huā）板等結果。我將操作中各個（gè）環節（jiē）常出現問（wèn）題的原因及解決辦法總結（jié）於下，以期給同行帶來一些啟發，提高試（shì）驗質量。

下麵分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因，並給出相應（yīng）的解決辦（bàn）法

1 選擇（zé）試劑 選擇質量優良的檢測試（shì）劑，嚴（yán）格按照試（shì）劑說（shuō）明書（shū）進（jìn）行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鍾。

2 加樣 可能原因： 1）血（xuè）清或血漿標本分（fèn）離不好即進行加（jiā）樣； 2）手工操作中，加樣（yàng）板過多造成加樣後放入孵箱（xiāng）前等待時間過長（特別是室內溫度較高時）； 3）加完標本再加（jiā）酶試劑時酶濺出孔外。解決辦法： 1） 標（biāo）本為血清：最好將血液先自然存放1-2小時後，再用3000rmp離心（xīn）15分鍾；標本為（wéi）血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本（běn）收集管，采血後必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時（shí）間（jiān）後，3000rpm離心15分鍾；若在幾天內檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置於-20℃的低溫冰箱內。 2） 加樣（yàng）後及時放入孵箱。 3） 加酶試劑後用吸水紙在酶標板表麵輕拭吸幹。 4） 如果采用AT或其他全自動加樣，最好選擇FAME或其他後處（chù）理儀器加（jiā）酶試劑（jì）。 5） 標本較多時，請（qǐng）分批操作。

3 孵育 可能原因： 1） 孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發，吸附於孔壁，難於清洗徹底； 2） 孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附於反應孔周圍，難以清洗徹底。解決辦法： 1） 貼封片或（huò）加蓋； 2） 按說明步驟嚴格控製（zhì）操作時（shí）間。

4 洗板 可能原（yuán）因： 1） 采用手工洗（xǐ）板,孔與孔之間液體交叉。 2） 采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導致洗板不徹底（dǐ）；洗板針堵塞，抽吸不完全；洗板不暢，導致洗板效果差。 3） 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法： 1） 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板後最好在吸水紙（選擇（zé）幹淨、無或少塵的吸水材料）上（shàng）輕輕拍幹； 2） 合理（lǐ）安排，或多用幾台洗板機。

5 顯色 可能原因： 1） 顯色劑配製後（hòu）放置時（shí）間過（guò）長或使用過期顯色劑； 2） 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解（jiě）決辦法： 1） 顯色劑盡量在臨用前配製，堅（jiān）持不用過期顯色劑，肉眼（yǎn）可見淺藍色的TMB顯色劑不用； 2） 加樣時保持顯色劑不外流（liú）； 3） A、B液應避免接觸金屬（shǔ）器械。

6 終止 可能原因如加終止液時產生較多氣泡，導致假（jiǎ）陽性增加。所以在加終止液（yè）時應避免產（chǎn）生（shēng）氣泡。

7 讀板 如讀板時（shí）板底不（bú）清潔等。應保證酶標板清潔。

所以（yǐ）在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸（suān）; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化，有效提高檢測質量。

在實際操作中，除了選擇優良試劑（jì）外，必須嚴格按（àn）照操作步驟進行（háng）操作，同時作好室內質控、室間質評，以嚴謹的工（gōng）作（zuò）作風檢測每一份標本，才能保證檢測（cè）質量。現（xiàn）在國內已有（yǒu）相當數量的單位擁有全自動酶標儀，這對於實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作（zuò）用。

本文關鍵詞：ELISA中常見問題及解決方法